过氧化氢能用ph7 4缓冲液配製吗为什么

2025-05-01ASPCMS社区 - fjmyhfvclm

小铃铛曦_阳的回答:


能。过氧化氢酶广泛存在于植物的所有组织中,能将过氧化氢分解为氧和水,可使生物机体免受过氧化氢的毒害作用。测定过氧化氢酶的方法有测压法、滴定法以及分光光度法等。

用氧电极银缓法测量放氧速度,方法灵敏而快速。放氧速度与过氧化氢酶活性成正比。

仪器药品。氧电极仪 记录仪。

电磁搅拌器 超级恆温水浴。

注射器、 微量注射器 容量瓶。

反应杯 亚硫酸做搏厅钠。

过氧化氢酶。

50mmol/l磷酸缓冲液,见附表2)。

50mmol/l过氧化氢溶液:取用磷酸缓冲液定容至250ml即得。

标準过氧化氢酶溶液:称取过氧化氢酶(sigma),溶于50mmol/l磷酸缓冲液(中,使酶浓度为10u/ml。

操作步骤。1.仪器的标定。

按实验88步骤进行仪器的标定,以求得记录纸上每小格相当的含氧量。

2.绘製酶活性标準曲线。

1)在反应杯中放满过氧化氢磷酸缓冲液,开启电磁搅拌器搅动10分钟,插入电极,吸去溢位在电极外面的溶液,调节移位旋钮,使记录笔位于满刻度的10─20%左右,使记录纸走动,1─2分钟后温度达到平衡,记录笔画出直线。

2)用微量注射器从电极塞小孔中注入10μ110u/ml过氧化氢酶,立即记录最初90秒钟内的氧释放曲线。

3)根据上述同样步骤,注入不同浓度的过氧化氢酶10μl(例如浓度为u/ml等),记录氧释放曲线。

4)取放氧曲线的直线部分,根据其斜率及走纸速度,计算每分钟氧的释放量。

5)以过氧化氢酶活性单位为横座标,每分钟氧的释放量为纵座标,绘製标準曲线。

3.样品测定。

1)在反应怀内注入50mmol/l过氧化氢磷酸缓冲液搅动10分钟,插上电极,待记录为一直线后,注入10μl合适浓度的待测酶液样品,立即记下最初90秒钟内的放氧曲线。

2)根据样品的放氧曲线,计算得到每分钟的放氧量,在标準曲线上查得酶活性大小。

3)如果没有标準的过氧化氢酶,不能计算酶活性单位时,也可以用每分钟的放氧量相对地纯隐表示酶的活性大小。

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